Cilt Hiperpigmentasyonu: Expozom Etkisini Anlamak

11.04.2022

SymBright® 2036 & SymBright^® PLUS

Bir bireyin çevresel maruziyetinin tamamı, 2005 yılında (CP Wild tarafından) ‘ekspozom’ olarak tanımlandı. O zamandan beri bu tanım, cildin yaşlanmasına neden olan tüm dış faktörler olarak (güneş radyasyonu, kirlilik, tütün, sıcaklık ve stres dahil olmak üzere) cilt maruziyetine uyarlanmıştır. Araştırma programımızda, cildin yaşlanma süreçlerinden biri olan ekspozomun neden olduğu koyu leke oluşumuna karşı cildi korumak için bir aktif geliştirmek amacıyla, seçilen ekspozom faktörlerinin cilt pigmentasyonu üzerindeki etkisi araştırıldı. Harici stresörler olarak UV ışıması, görünür ışık ışıması ve dizel egzoz partikülleri kullanılmıştır. Proje kapsamında geliştirilen aktif molekül SymBright 2036^® (INCI: Sclareolide) misk adaçayından (Salvia sclarea L.) elde edilebilen bir seskiterpen laktondur.

Giriş

Cildimize zarar veren dış etkenlerin listesi giderek uzuyor. Bunların hepsi, ciltte iltihaplanma ve melanin üretimini içeren ortak bir reaksiyon dizisini tetikliyor gibi görünüyor. Bu dizi tamamen cildin doğal savunma sisteminin bir parçasıysa, sonrasında genellikle aşırı reaksiyona neden olan pigmentasyon bozuklukları ve koyu lekeler oluşur. Cilt aydınlatması, daha koyu tenli etnik tüketicilere yönelik temel ‘beyazlatma’ yaklaşımından, cildi aydınlatmak ve kahverengi/yaşlılık lekelerinin görünümünü azaltmak için nokta hedefleme gibi yeni hedeflere kadar çok yol kat etti. Birçok tüketici için eşit olmayan cilt tonu bir utanç kaynağı olabilir. Tüketicilerin %58’i eşit olmayan bir cilt tonu nedeniyle kendilerini kötü hissediyor [1]. Her yaştan kadında cilt mükemmelliğine olan talep artıyor. Bu amaçlar için epidermisteki pigmentasyon mekanizmalarını anlamak önemlidir. Kozmetik ürünlerdeki tirozinaz inhibitörlerinin cilt pigmentasyonunun azalmasına katkıda bulunduğu kabul edilmektedir. Ancak çil ve melazma oluşumuna karşı korunmak için keratinositler ve melanositlerin karşılıklı olmayan pigmentasyona neden olan uyaranlar çeşitlidir: UV ışıması iyi bilinen bir pigmentasyon artırıcıdır; akne izleri, epilasyon veya tıraş lezyonları giderek daha etkili ürünler talep etmektedir [2]; ama aynı zamanda hava kirliliği de yakın zamanda lentijinlerin başlıca indükleyicisi olarak tanımlanmıştır [3,4]. Tüm bu uyaranlar, melanositleri çoğalmak, farklılaşmak, melanin üretmek ve melanozomları keratinositlere transfer etmek için tetikleyen, bir grup sitokin salan keratinositlerin temel mekanizmasını birleştirir ve en yaygın mekanizma postinflamatuar hiperpigmentasyon (PIH) olarak bilinir. Pigment lekeleri tedavi edilmezse ancak uzun bir süre içinde çözülebildiğinden [6] depigmentasyon etkisi ile birlikte PIH’ye karşı koruma en umut verici kozmetik tedavidir. Son yıllarda, güneş ışığının neden olduğu pigmentasyon hakkındaki görüş, tek UV kısmından görünür ışığın ek katkısına kadar çeşitlendi. Güneşin yaklaşık %52’si deniz seviyesinde görünür ışığa katkıda bulunduğundan [7] ve güneşin bu kısmı cildin derinliklerine nüfuz ettiğinden, son yıllarda görünür ışığın cilt fizyolojisi üzerindeki etkisine olan ilgi giderek artmaktadır [8]. Önemli bir gözlem, UV koruma ürünlerinin kullanılmasına rağmen cildin bronzlaşmasıydı ve bu da güneş ışığının UV’nin ötesinde pigmentasyonla bağlantılı kısımlarına daha derin bir bakış ihtiyacına yol açtı. Duteil (et al. [9]) görünür ışığın mavi/mor kısmı tarafından indüklenen pigmentasyonun, UV ile indüklenen pigmentasyona kıyasla daha kalıcı olduğunu güzel bir şekilde gösterdi. Bu kalıcı hiperpigmentasyona karşı koruma sağlayan ürünlere ilgi de artıyor. Mekanizmaları araştırmak ve güçlü aktifleri belirlemek için in vitro modeller geliştirilme aşamasındadır.

Malzemeler ve Yöntemler

Deri pigmentasyonu in vitro: B16V melanoma hücreleri 96-well mikrotitre plakasına ekildi. Yapışmadan sonra, test maddelerinin çeşitli konsantrasyonları ve 10 nM α-MSH eklenmiştir. 96 saatlik inkübasyondan sonra hücresel melaninin alkalin ekstraksiyonu yapıldı, absorpsiyon 400 nm’de ölçüldü. Deri pigmentasyonu ex vivo: Abdominal plastik cerrahiden elde edilen tam kalınlıkta insan derisi eksplantları (7 x 3 mm; Ø x kalınlık) kültür plakalarına aktarıldı ve kültür ortamına batırılmış bir pamuklu ped üzerine yerleştirildi. Test konsantrasyonu ve plasebo başına 4-6 deri eksplantı kullanıldı. Bir hidrodispersiyon jeli halinde formüle edilen SymBright 2036® günde bir kez topikal olarak uygulandı. 6. günde histolojik kesitler hazırlandı ve Fontana-Masson boyamasından sonra görüntü analizi ile melanin miktarı belirlendi. Kojik asit, pozitif kontrol olarak görev yaptı ve DMSO içinde %0.1’lik bir konsantrasyonda uygulandı.In vitro görünür ışık kaynaklı hiperpigmentasyon: İnsan epidermal melanom hücreleri A375, 6 oyuklu plakalarda kültürlendi. Hücreler, KG1 filtresi (kızılötesi A radyasyonunu filtrelemek için) ve HBM1 (Hydrosun) ile donatılmış Hydrosun 750 ile görünür ışığa (480 J/cm2) maruz bırakıldı (Medizintechnik GmbH, Müllheim , Almanya). Işınlamadan 48 saat önce ve sonra hücreler, sitotoksik olmayan konsantrasyonlarda test bileşikleri ile muamele edildi. Melanositler, bir NaOH çözeltisi içinde parçalandı. Melanin, 405 nm’de absorbans ölçümü ve bir melanin standart eğrisine dayalı hesaplama ile nicelendirildi. Görünür ışık kaynaklı hiperpigmentasyon ex vivo: Bitmiş formülasyonlar, fototip IV’e (Fitzpatrick ölçeği) sahip bir donörün abdominal cerrahisinden alınan ex vivo insan derisi eksplantlarına uygulandı. Formülasyonlar bir pamuklu ped ile çıkarıldıktan 48 saat sonra, deri eksplantları, KG1 filtresi ile donatılmış Hydrosun 750 ile görünür ışığa (480 J/cm2) maruz bırakıldı . Formülasyonlar daha sonra yeniden uygulandı. 48 saat sonra deri kesitleri hazırlandı ve melanin Fontana-Masson ile boyandı. Melanin analizi, görüntü analizi ile yarı nicel olarak yapıldı.

Kirlilik Kaynaklı Hiperpigmentasyon

Model DEP’ler: Ulusal Standartlar ve Teknoloji Enstitüsü, (Gaithersburg, MD, ABD)’nin standart referans malzemeleri (SRM’ler) SRM1650b (ortalama parçacık çapı 0.18 um), otantik sokak partikül maddesi için uygun vekiller olarak kullanıldı. SRM’ler fosfat tamponlu tuzlu su içinde süspanse edildi ve 1 dakika sonikasyona tabi tutuldu. Daha sonra doğrudan keratinositlere 1.5 ug/cm²’lik bir konsantrasyonda ilave edildi.RNA İzolasyonu ve PCR: Toplam RNA, daha önce tarif edildiği gibi hazırlandı [10]. Cyp1A1 ve MMP-1 geni, DEP’lerin uygulanmasından 6 saat sonra ölçülmüştür; IL-6 ve POMC geni, DEP’lerin qRT -PCR ile uygulanmasından 24 saat sonra ölçülmüştür . Her koşul için üç numune, her biri 2 belirleme ile işlendi.

Klinik Çalışma

Fototip II ile III’e sahip 24 Asyalı yetişkin denek, 0. Günden 48. Güne kadar günde iki kez önkollarına bir plasebo formülasyonu ve %0.2 SymBright^® ile aynı formülasyonu uyguladılar. Pigmentasyonu indüklemek için D0, D1, D2 ve D3 üzerinde ilerleyen bir UV dozuna (0,7 MED ila 1MED) maruz bırakıldılar. D7’de maksimum pigmentasyon elde edildi. Bu nedenle pigmentasyon varyasyonu D7’ye normalleştirilir.

Sonuçlar

SymBright 2036^®, 10.2 uM IC50 ile B16V melanom hücreleri üzerinde in vitro test edildiğinde güçlü bir aydınlatma etkisi gösterdi (Şekil 1A). Bir sonraki adımda, SymBrigh^t® bir hidrodispersiyon jel formülasyonunda %0.1’de dozlanan ex vivo insan derisi (foto tip ara ürün) üzerinde test edildi. Plaseboya kıyasla %41’lik bir azalma ile önemli bir aydınlatma etkisi gözlemlendi (Şekil 1B). Karşılaştırıldığında, DMSO içinde %0.1 oranında uygulanan pozitif kontrol kojik asit, melanin içeriğini %30 oranında azalttı. [caption id="attachment_137889" align="aligncenter" width="752"]

Şekil 1: Melanojenez inhibisyonu: SymBright 2036® in vitro (A) B16V hücrelerinde melanin üretimini inhibe etti. İnsan ex vivo deri eksplantlarındaki melanin, 6 gün sonra bir jel formülasyonunda uygulanan %0.1 SymBright® oranında azaltıldı; pozitif kontrol kojik asit, DMSO (B) içinde %0.1 uygulandı.[/caption] B16V hücreleri üzerinde yapılan in vitro deneyler ve ayrıca ex vivo eksplantların RTq -PCR'si nedeniyle, aydınlatma aktivitesinin melanositler üzerinde doğrudan bir etkiye dayandığı, aynı zamanda ilgili düzenlenmiş genlerden biri olarak POMC dahil olmak üzere keratinositler ve melanositler arasındaki değiştirilmiş bir karışmaya dayandığı gösterilmiştir. Görünür ışık kaynaklı hiperpigmentasyona karşı koruma, in vitro olarak insan A375 hücre hattında gösterilmiştir ve %0.00079 aktif indüksiyonun %70'ini önemli ölçüde inhibe eder (veriler gösterilmemiştir). [caption id="attachment_137890" align="alignleft" width="300"]

Şekil 2: Görünür ışığının neden olduğu melanin sentezinin ex vivo inhibisyonu.[/caption] [caption id="attachment_137891" align="alignnone" width="300"]

Şekil 3: POCM gen ekspresyonunun hava kirliliği kaynaklı uyarımı: SRM1650b, POMC gen ekspresyonunu önemli ölçüde uyarır. SymBright 2036® bu artışı önemli ölçüde engeller.[/caption] Kentsel kirlilikten kaynaklanan hiperpigmentasyon, dizel egzoz partikülleri SRM1650b uygulanarak in vitro olarak HaCaT hücreleri üzerinde araştırıldı ve bu da POMC proteininin artan salınımına neden oldu. Aktif doz %0.00025; bu artışı %49 oranında azaltmayı başardı. Bir in vivo çalışmada aktif, Asyalı deneklerin ön koluna %0.2 oranında uygulandı. Hiperpigmentasyon, üst üste 4 gün UV ışınlaması ile indüklendi. Aktif, hiperpigmentasyonu 48 gün içinde plaseboya kıyasla önemli ölçüde azaltmayı başardı. [caption id="attachment_137892" align="aligncenter" width="626"]

Şekil 4: in vivo UV kaynaklı pigmentasyon — 24 Asyalı yetişkin denek uygulaması - D0, D1, D2 ve D3’te 0,7 MED’den 1MED’e Maruz Kalma D7’de elde edilen maksimum pigmentasyon. Bu nedenle pigmentasyon varyasyonu D7’ye normalleştirilir. SymBright 2036®, 48 günlük uygulamadan sonra önemli bir sonuçla UV kaynaklı pigmentasyonu önleme konusunda iyi bir eğilim gösterir.[/caption]

Sonuç

Yüksek saflıkta üretilen SymBright 2036^®, doğal, güvenli ve sürdürülebilir bir üründür. Adaçayı saplarında, yapraklarında ve çiçekli kısımlarında sklareol içerir. Sklareolün biyotransformasyonu, sklareolid ile sonuçlanır. Daha sonraki ekstraksiyon ve konsantrasyon işlemleri ile sklerolid yüksek saflıkta elde edilir. Sklareolid on yıllardır koku üretimi amacıyla ve koku karışımlarında kullanıldığı için güvenlik profili iyi bilinmektedir. SymBright 2036^® Çin’de onaylı, tescilli bir kozmetik içerik maddesidir. SymBright 2036^® cildi, yüz ve vücutta kalıcı hiperpigmentasyon bozukluklarına yol açabilecek zararlı çevresel etkilere karşı aşırı tepkilerden en iyi şekilde korur. Sadece birkaç haftalık kullanımdan sonra gözle görülür sonuçlarla, cildi hava kirliliğinin ve UV ışınlarının ve mavi ışığın zararlı etkilerine karşı koruduğu tespit edilmiştir. Cildin doğal parlaklığı korunur ve hatta geri gelir. Sırasıyla UV veya hava kirliliğinin neden olduğu hiperpigmentasyona karşı koruma, depigmentasyon etkisi ile birlikte lekelere ve homojen olmayan pigmentasyona karşı en umut verici kozmetik tedavidir. SymBright 2036^® tarafından bu özellikler tek bir aktifte bir araya getirilerek deodorant, epilasyon ve akne uygulamaları için çekici bir malzeme olmasının yanı sıra gün boyu zararlı etkilere karşı koruma sağlayan gündüz kremleri için de son derece uygundur. Cildi aydınlatır ve kahverengi/ yaşlılık lekelerinin görünümünü azaltır.

Parlak Cilt için Parlak Partner

Exposome’ın öncü kaşifi olarak Symrise, pigmentasyon için sürekli olarak yeni çözümler geliştiriyor. Karanlık noktalar artık yeni kırışıklıklar olarak algılanıyor ve Symrise bu özel endişenin üstesinden gelmenin yollarını araştırarak optimize edilmiş etkinliğe sahip parlak bir ortak arıyor. Rekortmen aktifimiz SymBright^® 2036’dan yararlanmak için akıllı ve verimli bir kombinasyon aradık. Niacinamide - B3 vitamini - SymBright® 2036’nın etkinliğini artırmak için mükemmel bir eşleşme olarak kullanıma hazır bir sıvı karışımı olan SymBright^® PLUS geliştirildi.

SymBright^® PLUS’ın Test Etkinliği

UV ışığı, iki ana farklı yolla ciltte melanogenezi indükleyebilir: Melanositin doğrudan aktivasyonu veya Reaktif Oksijen Türleri (ROS) oluşturarak dolaylı bir yol (örneğin çevreleyen keratinositlerde). Bu keratinositler, daha sonra salgılanan ve ardından melanogenezi uyaran stres sinyalleri üreterek ROS’a tepki verir. [caption id="attachment_137893" align="aligncenter" width="513"]

Şekil 5: UV ışığı ile melanogenez indüksiyonu için doğrudan ve dolaylı yolun şematik gösterimi.[/caption] Yeni piyasaya sürülen bileşen SymBright^® PLUS bir cilt parlatıcı olarak geliştirilmiştir. Bu nedenle UV ışınlarına maruz kalan insan derisi eksplantları üzerindeki etkinliğini değerlendirdik. Dolaylı aktivasyon yolu için başlangıç noktası olarak ROS üretimi çok hızlı bir süreç olduğundan, SymBright^® PLUS'ın 60 J/cm2 UVA ile ışınlanmış deri eksplantlarında ROS miktarını azaltma kabiliyetini inceledik. Şekil 6’da, deri eksplantlarının enine kesitleri, dokuda ROS varlığının göstergesi olan yeşil bir floresan sinyali ile gösterilmektedir. [caption id="attachment_137894" align="aligncenter" width="793"]

Şekil 6: İnsan derisi eksplantlarından alınan histolojik kesitlerin floresan boyaması (DCFH-DA) (kadın donör, yaş 51, ITA açısı 36° “orta”); floresan yoğunluğu dokudaki ROS varlığı ile ilişkilidir. Ölçek çubukları 100 μm’yi temsil eder.[/caption] Floresansın nicelleştirilmesi, test numunelerinin ROS azaltıcı aktivitesinin değerlendirilmesine izin verir. SymBright^® PLUS, UV ışınlı kontrole kıyasla ROS skorunda %66’lık bir düşüşe yol açtı. Ayrıca SymBright^® PLUS’ı oluşturan bileşenler kendi konsantrasyonlarında test edildi ve tek bileşenlerin hiçbiri SymBright^® PLUS’ın ROS azaltmasındaki etkinliğe ulaşmadı. Bu sonuç, insan derisinde ROS azalması açısından SymBright^® PLUS’ın tek bileşenlerine karşı üstünlüğünü göstermektedir. İkinci bir deneyde, SymBright^® PLUS’ın UV kaynaklı pigmentasyon üzerindeki etkisini analiz ettik. İnsan derisi eksplantları (kadın donör, yaş 43, ITA açısı 24° “tabaklanmış”) 7 gün boyunca 75 mJ/cm²’lik bir dozla UVB ışımasına maruz bırakıldı. Deri eksplantlarındaki melanin içeriğinin kantitatif değerlendirmesi Fontana-Masson boyaması kullanılarak yapıldı. SymBright^® PLUS, deri eksplantlarındaki melanini UV kontrolüne kıyasla %26 oranında azalttı (bkz. şekil 7). [caption id="attachment_137895" align="aligncenter" width="692"]

Şekil 7: Test öğeleriyle 7 günlük tedaviden ve ardından 75 mJ/cm2 UV B ışımasına maruz bırakıldıktan sonra insan derisi eksplantlarında Fontana Masson boyamasıyla melanin içeriğinin değerlendirilmesi . Siyah boyama, melanin varlığının göstergesidir ve görüntü analizi ile ölçülmüştür. Ölçek çubukları 100 μm’yi temsil eder.[/caption] Melanin içeriğindeki değişiklikler, mevcut melaninin bozulmasından veya pigmentin biyosentezinin azalmasından kaynaklanabilir. SymBright^® PLUS’ın melanogenez üzerindeki etkisini değerlendirmek için, melanogenezin gerçekleştiği organeller olan melanozomların de novo oluşumunun ve olgunlaşmasının belirteci olarak Melan-A’nın bolluğunu analiz ettik. UVB ışınlı cilt eksplantlarının SymBright^® PLUS ile tedavisi, UV uygulanmış araç kontrolüne kıyasla Melan-A sinyallerinde %64’lük bir azalmaya yol açtı. Ayrıca, SymBright^® PLUS, de novo melanogenezin göstergesi olan Melan-A sinyallerini azaltmada tek bileşiklerinden daha iyi performans göstermiştir. [caption id="attachment_137896" align="aligncenter" width="619"]

Şekil 8: Test öğeleriyle 7 günlük tedaviden ve 75 mJ/cm2 UVB ile günlük ışınlamadan sonra insan derisi eksplantlarının kesitlerindeki Melan-A sinyallerinin temsili görüntüsü . Gösterilen resim, UVB ışınlamalı araç kontrolüdür. Koyu kırmızı renkli hücreler (siyah oklarla gösterilen örnekler) Melan-A içerir ve bu nedenle de novo melanogenez ile meşgul oldukları kabul edilir. Ölçek çubuğu 100 μm'yi temsil eder.[/caption] Birlikte ele alındığında, bulgularımız, insan derisi eksplantlarında UV kaynaklı ROS türlerinde çok iyi bir azalmanın yanı sıra SymBright^® PLUS tarafından melanogenezde önemli bir azalma olduğunu, dolayısıyla potansiyel olarak UV kaynaklı melanogenez için hem doğrudan hem de dolaylı yol üzerinde bir etki uyguladığını göstermektedir. Ürün, ROS inhibisyonu ve de novo melanogenez açısından tek bileşenlerden daha iyi performans göstermektedir.

Sonuç

SymBright^® PLUS, düzensiz cilt pigmentasyonu ve hiperpigmente lekelerin önlenmesi için çok yönlü ve in vivo olarak kanıtlanmış etkili bir çözümdür. Kullanımı kolay sıvı formu sayesinde günlük yüz ve vücut bakımı, leke önleyici kozmetik ürünler, doku maskeleri gibi birçok uygulamada kullanılabilir. Referanslar / References: 1. CMI Veri Kaynağı: Symrise Kozmetik Bileşenleri Tüketici veri tabanı 2012-2013 (10 pazarda 36 000 tüketici) 2. Ortonne ve Bissett (2008) J Araştırması Dermatol semptom İşlem 13(1):10-4 3. Vierkötter ve diğerleri (2010) J Invest Dermatol 130(12): 2719-2726 4. Nakamura ve diğerleri (2015) Uzm . Dermatol 24(6): 407-11 5. Yamaguchi ve Hearing (2009) Biofactors 35(2): 193-9 6. Davis ve Callender (2010) J Clin Esthet Dermatol 3(7):20-31 7. CIE Teknik Raporu No 85,1989, tablo 4 'Deniz seviyesinde küresel güneş ışınımı' 8. Dupont, E., Gomez, J., Bilodeau , D., Int J Cosmet bilim _ 35(3 ): 224-32 (2013) 9. Duteil, L., Cardot -Leccia, N., Queille -Roussel, C., Maubert, Y., Harmelin , Y., Boukari , F., Ambrosetti , D., Lacour, JP, Passeron, T., Pigment Hücresi Melanom Res 27(5 ): 822-826 (2014) 10. Grether -Beck ve diğerleri (2008) Exp Dermatol 17 :771-79