Kolon ömrü, analitik koşullara ve saklama yöntemine bağlıdır. Burada kolon hasarının nedenlerini ve bunlarla nasıl başa çıkılacağını tanıtıyoruz.
1. Kolonda Kirlilik Birikmesi
Kolondaki kirlilik, pik şekillerini bozar. Bu durumda, lütfen önce kolon yıkamayı deneyin. Örneğin, ters fazlı kolonlar için sağdaki akış şemasını takip edin.
Metanol ve asetonitril genellikle yıkama işleminde kullanılan çözücülerdir, ancak kirlilik bu çözücülerle yıkanamıyorsa 2-propanol veya asit içeren organik çözücüler onu çıkarabilir.
Kirlilik birikmesi sıklıkla meydana geliyorsa, bir guard kolonunun kullanılması tavsiye edilir. Bazen, katı faz ekstraksiyonu gibi ön işlemlerle numune matrisini elimine etmek etkilidir.
Yetersiz end–capped kolonların daha kolay kirlilik biriktirme eğiliminde olduğunu unutmayın.
2. Kolon Filtrelerinin Tıkanması
Kolonun her iki ucunda dolgu maddesinin dışarı sızmasını önlemek için filtreler bulunmaktadır. Numunedeki veya hareketli fazdaki çözünmeyen bileşikler bu filtreleri tıkayabilir.
Bu durumda, kolon basıncı kademeli olarak artar ve sonunda kolon basıncı hareketli fazı iletmek için çok yüksek hale gelir.
Bu olay görüldüğünde, analizden önce numuneyi veya hareketli fazı filtreleyin. Analitik kolon, önüne bir guard kolon takılarak da korunabilir.
Genel olarak, silika parçacıkları ne kadar büyükse, filtre ağı da o kadar büyük olur. Bu, çözünmeyen bileşiklerin filtrelerden geçmesini kolaylaştırır.
Bu nedenle, filtre tıkanmasını önlemek için büyük partiküllerle dolu bir kolon seçmek bir seçenektir.
3. Fonksiyonel Grupların Ayrışması
Yüksek konsantrasyonlu asitler veya bazlar bazen alıkonma zamanlarını kısaltır. Bu muhtemelen, fonksiyonel grupların dolgu maddesinin yüzeyinden ayrılmasından kaynaklanmaktadır.
Kopan fonksiyonel grupların tekrar bağlanması mümkün olmadığı için pH ve sıcaklığı önerilen değerler içinde tutulur.
Uzun süreli saklama için kolondaki solventin asit veya baz içermeyen organik bir solvent ile değiştirilmesi ve kolon uçlarının kapatılması önerilmektedir.
4. Dolgu Maddesinin Bozulması
Bazı çözücüler dolgu maddesini bozar. Örneğin, bazik çözeltiler hidroliz yoluyla silikayı kademeli olarak çözer. Malzeme ve çözücünün kombinasyonuna bağlı olarak polimerler şişebilir.
Genel olarak, dolgu maddesinin bozulması kolon basıncını arttırır ve plaka sayısını
düşürür. Bu nedenle, bozulmuş dolgu maddeleri düzeltilemeyeceğinden kolonunuza zarar vermemek için lütfen pH aralığı gibi talimatlarda gösterilen çalışma koşullarını koruyun.
Yüksek hidrofobikliğe sahip dolgu maddesi genellikle silikanın hidrolizini önler. Temel
koşullar altında ODS kolonları bu anlamda C8 kolonlarından üstündür ve ODS kolonları arasında karbon yükü ne kadar yüksekse kolon ömrü de o kadar uzun olacaktır.
5. Dolgu Durumunda Değişiklik
Kolon basıncı maksimum çalışma basıncını aştığında veya aniden dalgalandığında kolondaki partiküllerin dolgu durumunu değiştirebilir.
Dolgu durumundaki kusurlar, mobil fazın akışını düzensiz hale getirir, bu da bozuk piklere veya daha düşük plaka sayılarına neden olur. Dolgu durumundaki değişikliği önlemek için alınacak önlemlerden biri, kolon basıncını maksimum çalışma basıncının çok altında tutmaktır.
Örneğin, aynı kolon boyutlarına (yani, I.D. ve kolon uzunluğu) ve partikül boyutuna sahip ODS kolonları arasında bile kolon basıncı, dolgu malzemesine bağlıdır.
Mümkün olduğu kadar düşük basınç üreten bir kolonun seçilmesi, kazayla maksimum çalışma basıncını aşarak kolona zarar verme risklerini en aza indirebilir.
Doğan Özdemir
Satış Mühendisi
GLSciences Ürün Sorumlusu
Ant Teknik
